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植物高爾基體提取試劑盒（酶法）
植物高爾基體提取試劑盒
試劑盒儲存條件：
【注】：2-8℃ 保存。
試劑瓶開蓋后各組份按要求條件保存。
拆封后請盡快使用完!
試劑盒組成：
產(chǎn)品組成 組份編號 有效期：
規(guī)格 50T 100T
試劑
A：高爾基體提取液A 50ml 100ml 36042A
試劑
B：高爾基體提取液B 25ml 50ml 36042B
試劑
C：試劑WT 1ml 1ml 36042C
試劑
D：高爾基體保存液D 10ml 20ml 36042D
使用說明書一年。
植物高爾基體提取試劑盒-非酶法
【注】：
有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
試劑拆封后請盡快使用完!
注意事項：
1.正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。
2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3.禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4.樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5.最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6.實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。
產(chǎn)品簡介：
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體。
本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能，可以用于各種下游應用。
除了高爾基體提取試劑盒，還有細胞核提取、線粒體提取等各種亞細胞結構的提取試劑盒以及相關的蛋白質提取試劑盒。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基
體。
本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能，可以用于各種下游應用。
除了高爾基體提取試劑盒，還有細胞核提取、線粒體提取等各種亞細胞結構的提取試劑
盒以及相關的蛋白質提取試劑盒。
儀器：
離心機
振蕩器
渦旋混勻器
Dounce勻漿器
移液器
冰箱
冰盒
試劑：PBS (pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mMNaCl和3mM KCl)
耗材：
離心管
吸頭
手套
植物高爾基體提取試劑盒（酶法）
使用方法：
使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是高 爾基體回收率會下降。 離心機轉速有相對離心力(RCF，×g)和每分鐘轉速(RPM，r/min)兩種表示方式，有些離心機 設置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算： g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單 位為厘米) 例如: 轉速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對離心力(RCF，×g)為 =10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
1. 取 200-500 mg 新鮮植物葉片組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。
2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。
植物高爾基體提取試劑盒-酶法
【注】：
也可用刀片將葉片樣本切成小塊。
3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。
4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 次。
【注】：
每上下一個來回為一次。
也可以用電動勻漿機充分勻漿。
5. 將勻漿液在 4℃，1000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。
6. 將上清在 4℃，3000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。
7. 將上清在 4℃，6000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。
8. 在上清中加入 10ul 試劑WT，在 4℃，50000g 力條件下離心 20 分鐘。
【注】：
沒有 50000g 離心條件，可以降低離心力。
至少要保證 20000g 以上離心力。
降低離心力后高爾基體回收率會下降。
9. 棄上清，在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，混勻。
10. 在 4℃，50000g 力條件下離心 30 分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：
沒有 50000g 離心條件，可以降低離心力。
至少要保證 20000g 以上離心力。
降低離心力后高爾基體回收率會下降。
11. 沉淀用高爾基體保存液重懸保存或直接用于下游實驗應用。
【注】：
可以不用試劑盒中提供的保存液。
根據(jù)實驗需要用自己的其他緩沖液保存或直接用于下游實驗
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