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酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)原理
更新時間:2025-05-19瀏覽:290次

  酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)原理

  酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合與酶催化顯色的免疫檢測技術,其核心原理可分為以下關鍵步驟:

  一、固相載體包被

  抗原/抗體固定化?

  將已知抗原或抗體吸附于固相載體(通常為聚苯乙烯微孔板)表面,并保持其免疫活性

  封閉處理?

  使用無關蛋白(如BSA)封閉未結(jié)合位點,減少非特異性結(jié)合


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  二、特異性結(jié)合反應

  樣本孵育?

  加入待測樣本,目標分子(抗原或抗體)與固相載體上的對應結(jié)合物形成免疫復合物

  洗滌分離?

  通過多次洗滌去除未結(jié)合的游離成分,確保反應特異性

  三、酶標記與信號放大

  酶標二抗/抗原?

  加入酶標記的抗體或抗原(如HRP標記),與目標分子特異性結(jié)合

  催化顯色?

  加入底物(如TMB)后,酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物,顏色深淺與目標物濃度成正比

  四、檢測與定量

  光學測量?

  使用酶標儀測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算目標物濃度

  靈敏度優(yōu)勢?

  酶的高效催化作用可放大信號,檢測限可達皮摩爾級別

  常見方法類型

  類型 特點 適用場景

  直接法? 酶標一抗直接結(jié)合抗原,步驟簡單但靈敏度較低 單一抗原檢測

  間接法? 使用酶標二抗放大信號,提高靈敏度 抗體檢測(如血清學)

  夾心法? 需兩種特異性抗體分別捕獲和檢測抗原,特異性最高 復雜樣本中的微量抗原

  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術老師或供應商。

  注:實際應用中需根據(jù)檢測目標選擇方法類型,并優(yōu)化包被濃度、封閉條件等參數(shù)。以上資料僅供參考具體請咨詢技術老師或供應商。

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