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天津本生:ELISA實驗中常見的問題有哪些?
更新時間:2025-05-15瀏覽:388次

  天津本生:ELISA實驗中常見的問題有哪些?


  以下是ELISA實驗中常見問題及解決方案的綜合整理:

  一、顯色異常問題

  顯色淺/靈敏度低?

  試劑未充分平衡(室溫平衡≥20分鐘)

  樣本類型不適(如組織裂解液需優(yōu)化稀釋條件)

  底物孵育時間不足(建議顯色15分鐘內(nèi)終止)

  背景高/假陽性?

  洗滌不凈(洗液注滿孔,靜置15秒后拍干)

  底物污染(避光保存,若變黃需更換)

  非特異性結(jié)合(使用合適封閉液,避免抗體過量)


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  二、操作相關(guān)問題

  加樣誤差?

  加樣量不一致(校準(zhǔn)移液器,控制單次加樣時間≤5分鐘)

  交叉污染(使用一次性吸頭,避免濺灑)

  孵育問題?

  溫度波動(推薦37℃恒溫,避免開蓋蒸發(fā))

  時間過長(嚴(yán)格按說明書控制,避免非特異性結(jié)合)

  洗滌問題?

  洗板不凈(洗液需1:20稀釋,避免結(jié)晶未溶解)

  拍干不充分(使用無塵濾紙,勿重復(fù)拍板)

  三、重復(fù)性差

  原因?:操作人員或條件不一致(如加樣時間、洗滌力度差異)

  解決?:

  同一人員操作,使用振蕩器混勻樣本

  標(biāo)準(zhǔn)化孵育時間和溫度

  四、其他典型問題

  白板現(xiàn)象(無顯色)?

  漏加酶標(biāo)抗體或顯色劑

  試劑失活(檢查保存條件是否為2-8℃)

  標(biāo)準(zhǔn)曲線異常?

  復(fù)溶不當(dāng)(凍干標(biāo)準(zhǔn)品需冰上溶解,避免反復(fù)凍融)

  稀釋誤差(使用硅化EP管減少蛋白吸附)

  關(guān)鍵預(yù)防措施

  樣本處理?:血清/血漿離心后分裝,避免反復(fù)凍融

  試劑保存?:顯色劑現(xiàn)配現(xiàn)用,洗滌液室溫使用

  設(shè)備校準(zhǔn)?:定期校驗移液器和酶標(biāo)儀波長

  如需具體問題排查,可結(jié)合實驗步驟對照上述要點。以上資料僅供參考。

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