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BUNSEN本生快訊——pcr 耗材,八聯(lián)管、pcr 96孔板如何選擇
更新時(shí)間:2023-03-29瀏覽:884次

  BUNSEN本生快訊——pcr 耗材,八聯(lián)管、pcr 96孔板如何選擇!


  先我們來(lái)聊聊 PCR 實(shí)驗(yàn)中很關(guān)鍵的要素——耗材。作為 PCR 常客,了解BUNSEN本生 PCR 耗材相關(guān)的特性和術(shù)語(yǔ)是有必要的。

  市面上的  PCR 耗材有很多,各種品牌、規(guī)格、顏色等,讓人眼花繚亂。我們來(lái)慢慢認(rèn)識(shí)它。材質(zhì) PCR  耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一種很好的耐熱惰性物質(zhì)(使用溫度范圍為 -30~140℃),能夠承受 PCR  反應(yīng)熱循環(huán)過(guò)程中的熱能變化,很好地封閉和保護(hù) PCR 反應(yīng)體系中的物質(zhì)。

  顏色常見(jiàn)的有白管和透明管。在傳統(tǒng) PCR 實(shí)驗(yàn)中,兩者沒(méi)有區(qū)別。但是,在相同的熒光定量/qPCR 實(shí)驗(yàn)中,對(duì)于頂端信號(hào)讀取的 qPCR 儀器(在管的上方采集熒光信號(hào))來(lái)說(shuō),白管的靈敏度和一致性相對(duì)更高。這是為什么呢?

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  >>與透明管相比,A 白管得到的 Ct 值更低;B 白管得到的重復(fù)性更好

  qPCR  的核心數(shù)據(jù)是 Ct 值,而熒光信號(hào)是 Ct  值計(jì)算的數(shù)據(jù)來(lái)源,所以管內(nèi)的熒光能否完好地傳遞至檢測(cè)器是至關(guān)重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過(guò)管壁和折射(下圖  A),進(jìn)而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁),被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管,在白管的頂端能夠采集到更強(qiáng),更聚焦的熒光信號(hào)。

  A 透明管和白管中熒光信號(hào)走向;B 分別加入等量熒光素后,熒光強(qiáng)度對(duì)比

  So,假如你正在使用的是頂讀 qPCR 儀,那么安利一下,不妨用白管試試哦~

  質(zhì)量(是否干凈)這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量的重要性。qPCR  耗材必須沒(méi)有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和 DNA 酶,但不能去除灰塵和 DNA 殘留,它們可能會(huì)抑制 PCR  反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。物質(zhì)是具有吸光度的,即便是很小的污染物也會(huì)吸收反應(yīng)體系中的熒光,影響熒光信號(hào)的采集。用一個(gè)夸張版的實(shí)驗(yàn)來(lái)演示一下雜質(zhì)污染對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,在BUNSEN本生八聯(lián)排的一個(gè)反應(yīng)孔中放入一粒雜質(zhì),不出所料,擴(kuò)增結(jié)果曲線(xiàn)出現(xiàn)了顯著的異常。

  ↑ 8 復(fù)孔重復(fù)性反應(yīng)結(jié)果,左邊孔中的雜質(zhì)讓曲線(xiàn)“跑偏"

  Tips 注意不要讓耗材暴露在空氣中,取出耗材后,一定要快速封好包裝袋,避免用裸手接觸。有條件的話(huà),可在超凈臺(tái)中操作。容量/尺寸/通量

  容量決定了可加樣的多少(反應(yīng)體積)。加樣過(guò)多會(huì)導(dǎo)致熱傳導(dǎo)效率下降,溢出或交叉污染;而加樣不足會(huì)引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR 儀的加熱模塊也會(huì)決定可適配的耗材和適用的反應(yīng)體系大小。通量很容易理解,就是單次實(shí)驗(yàn)上多少個(gè)樣品。常見(jiàn)的容量和通量規(guī)格如下表所示

  單管/八聯(lián)排 0.2mL、0.1mL

  

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  96 孔板 0.2mL、0.1mL

  

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  384 孔板 0.02mL

  

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  容量規(guī)格也常用標(biāo)準(zhǔn)和低容量來(lái)區(qū)分。low   profile(低容)耗材的高度更低,這種短小設(shè)計(jì)地減少了反應(yīng)體系上方的空間(“死體積"——無(wú)用部分),降低熱循環(huán)過(guò)程中的蒸發(fā)影響,同時(shí)能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹,提高熱傳導(dǎo)效率。因此,低容管也被稱(chēng)為“快速"管或板。

  Tips 常見(jiàn)的反應(yīng)體積一般為 20 µL,推薦使用 BUNSEN本生0.1 mL 或 low profile 的低容反應(yīng)管。管壁厚度

  PCR 耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的熱傳導(dǎo)。超薄管壁較標(biāo)準(zhǔn)版薄 50%,可進(jìn)一步減少熱屏障,帶來(lái)更快更好的反應(yīng)效果。當(dāng)然,建議選超薄的。

  透明度  qPCR 的管蓋和封膜需要具有很高的光學(xué)透性,確保的熒光信號(hào)的穿透和傳遞,減少失真(針對(duì)頂讀 qPCR  儀)。管壁的透明度越高反倒會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,理由在面解釋過(guò)。傳統(tǒng) PCR 可忽略此特點(diǎn)。裙邊 PCR  板的裙邊指的是板的周?chē)由觳糠?。額.......這個(gè)裙邊作用是在構(gòu)建反應(yīng)體系時(shí)為移液過(guò)程提供穩(wěn)定性支撐,以及結(jié)合自動(dòng)化工作站時(shí)提供機(jī)械強(qiáng)度和抓手。常見(jiàn)的有三種:無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊(對(duì)應(yīng)下圖  A、B、C)。

  Tips 簡(jiǎn)單理解就是,裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動(dòng)化批量處理提供便利,與機(jī)械臂的結(jié)合。在常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)室中可能不太需要,使用無(wú)裙邊板即可。

  封板膜

  



  BUNSEN本生PCR 封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見(jiàn),適配于 96 或 384 孔板,要有足夠好的光透性。

  黏性鋁膜可能比較少見(jiàn),盡管不適合 qPCR,但對(duì)于光敏樣品是的耗材,由于可以穿刺,便于 PCR 中樣品轉(zhuǎn)移。(適用于傳統(tǒng) PCR)

  總結(jié):耗材作為 PCR 體系的載體,對(duì)提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量是非常重要的。 有關(guān) pcr 耗材,八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇!?本生生物小編就分享到這了,看完本文您就應(yīng)該有了基本的認(rèn)識(shí)和了解相信大家都明白了吧!總的來(lái)說(shuō),希望對(duì)大家有所幫助。


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